充填剤
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MacroSep IEX Qは独自のマクロポア構造を有し、分子量やサイズが大きいモダリティに合わせて担体設計を最適化しているため、高分離・高吸着容量・高速の精製が可能です。ウイルスベクターやプラスミドDNAなどの新モダリティの精製に最適です。
| 仕様 | |
| 基材 | 親水性メタクリレートポリマー |
|---|---|
| 粒子径 | 30 µm |
| 細孔径 | 900 nm |
| イオン交換基 | -R-N+(CH3)3 |
| イオン交換容量 (meq/mL-resin) | >0.08 |
| 動的吸着容量 (mg/mL-regin) | 30 (Thyroglobulin) |
| 使用pH範囲 | 2-12 |
MacroSep IEX Qは、分子量の大きい分子に対して高いDBCを示す粒子設計をしています。このため、従来品のBioPro IEX SmartSep Q30と比較して、分子量66,000のBovine serum albuminに対してはそれほど高いDBCは得られませんが、分子量660,000のThyroglobulinに対しては、比較した担体の中でも最も高いDBCを示しています。
| DBC （mg/mL-resin, 10% breakthrough） | ||
|---|---|---|
| Thyroglobulin （MW 660,000） |
Bovine serum albumin （MW 66,000） |
|
| MacroSep IEX Q | 30 | 41 |
| BioPro IEX SmartSep Q30 | 9 | 101 |
| 市販イオン交換担体A （大きなスルーポア構造） |
26 | 74 |
| 市販イオン交換担体B （モノリスタイプ） |
23 | 31 |
| 動的吸着容量測定条件* | |
| Column | 50 X 5.0 mmI.D. or 1 mL |
|---|---|
| Temperature | ambient (25°C) |
| Detection | UV at 280 nm |
* 条件の詳細はお問い合わせください。
アデノ随伴ウイルス（AAV）のFull/Emptyカプシドの分離において、流速を高くすると、市販イオン交換担体ではピークのブロードニングが認められますが、MacroSep IEX Qでは良好な分離が維持されています。
MacroSep IEX Qでは、高い流速でも分離能が低下しないため、精製時間の短縮が可能です。
| Column | 50 X 5.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Bis-tris propane-HCl (pH 9.0) B) 20 mM Bis-tris propane-HCl containing 0.5 M TMAC* (pH 9.0) |
| Gradient | 10-50%B (45 CV) |
| Temperature | 25°C |
| Detection | FLS at Ex. 280 nm, Em. 348 nm |
| Injection | 30 µL |
| Sample | AAV2 (1.07 X 1011 vg/mL) |
* tetramethylammonium chloride
This research was supported by AMED under Grant Number JP18ae0201001.
AAVのFull/Emptyカプシドの分離例を示しています。Fullカプシドの精製フラクションの純度は、超遠心分析 （AUC）で90%以上と高い値を示しました。
MacroSep IEX QはFull/Emptyカプシドの分離が良好で、AAVのクロマトグラフィー精製に適しています。
| Column | MacroSep IEX Q (30 µm), 50 X 5.0 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Bis-tris propane-HCl (pH 9.0),1% sucrose, 0.1% poloxamer 188 B) 20 mM Bis-tris propane-HCl containing 0.5 M CC* (pH 9.0), 1% sucrose, 0.1% poloxamer 188 |
| Gradient | 0-60%B (36 CV) |
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | ambient (25°C) |
| Detection | UV at 280 nm |
| Injection | 48 mL |
| Sample | AAV2 (0.72 X 1011 vg/mL) |
* choline chloride
This research was supported by AMED under Grant Number JP18ae0201001.
プラスミドDNAのアイソフォーム分離において、MacroSep IEX Qは市販イオン交換担体に比べシャープなピーク形状が得られ、トランスフェクション効率が高いsupercoiled体と、効率低下の原因となるlinear体およびopen circular体を良好に分離できています。
| Column | 50 X 5.0 mmI.D |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.5) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.5) containing 1.0 M NaCl |
| Gradient | [MacroSep IEX Q] 82%B (0-1.5 min), 82-86%B (1.5-22.5 min) [市販イオン交換担体A] 77%B (0-1.5 min), 77-81%B (1.5-22.5 min) |
| Flow rate | 0.4 mL/min |
| Temperature | 25°C |
| Detection | UV at 260 nm |
| Injection | 10 µL (60 µg/mL) |
| Sample | [SC] pUC19 plasmid extracted from E. coli (2686 bp) [OC] pUC19 plasmid digested with nicking endonuclease Nt.BspQΙ [L] pUC19 plasmid digested with restriction enzyme BamHΙ |
