カラム
Accura BioPro IEXおよびBioPro IEXは、非特異的吸着が極めて小さい親水性ポリマーに強アニオン/強カチオン交換基を導入したイオン交換カラムです。
ノンポーラスタイプは、細孔内拡散が生じないため高分離能で、バイオ医薬品や核酸医薬品の特性解析・品質管理などに最適です。
また、ウイルスベクターなど分子サイズの大きいモダリティの分離にも適用できます。
これらの吸着性成分の分離にはバイオイナートコーティングハードウエアのカラム Accura BioPro IEXが有効です。
BioPro IEXのポーラスタイプは、高吸着容量・高回収率でラボスケールの精製にも有効です。
| 強アニオン交換カラム Accura BioPro IEX QF BioPro IEX QF |
強カチオン交換カラム Accura BioPro IEX SF BioPro IEX SF |
強アニオン交換カラム BioPro IEX QA |
強カチオン交換カラム BioPro IEX SP |
|
|---|---|---|---|---|
| 基材 | 親水性ノンポーラスポリマー | 親水性ポーラスポリマー | ||
| 粒子径 (µm) | 3, 5 | 5 | ||
| イオン交換基 | -CH2N+(CH3)3 | -CH2CH2CH2SO3- | -CH2N+(CH3)3 | -CH2CH2CH2SO3- |
出荷時対イオン |
Cl- | Na+ | Cl- | Na+ |
| イオン交換容量
[参考値] (meq/mL-resin) |
0.09 | 0.24 | 0.09 | 0.09 |
| 動的吸着容量 (mg/mL-resin) |
>12 (BSA) | >10 (human-IgG) | >110 (BSA) | >70 (human-IgG) |
| 使用温度範囲 | 4-80°C（Accura BioPro IEX） 4-60°C（BioPro IEX） |
4-60°C | ||
| 使用pH範囲 | 2-12 | |||
| カラム材質 | バイオイナートコーティングステンレス（Accura BioPro IEX） PEEK（BioPro IEX） |
PEEK | ||
Accura BioPro IEX SFと市販カラムについて、同一条件でモノクローナル抗体の分離を比較しています。
Accura BioPro IEX SFは市販カラムに比べてピーク形状がシャープで、チャージバリアントと考えられるピークの分離も良好です。
| Eluent | A) 10 mM MES-NaOH (pH 6.6) B) 10 mM MES-NaOH (pH 6.6) containing 1.0 M NaCl 0-20%B (0-15 min) |
|---|---|
| Flow rate | 0.5 mL/min for 4.6 mmI.D., 0.378 mL/min for 4.0 mmI.D. |
| Temperature | 25°C |
| Detection | UV at 280 nm |
| Sample | Bevacizumab |
BioPro IEX QFでは、ホスホロチオエート型オリゴ核酸のPO型不純物を良好に分離できています。
1. DNA 15mer, 12PS, 2PO (5’-T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^TTT-3’)
2. DNA 15mer, 13PS, 1PO (5’-T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^TT-3’ )
3. DNA 15mer, All PS
(5’-T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T^T-3’ )
^=Phosphorothioated
| Column | BioPro IEX QF (5 µm), 100 X 4.6 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) 10 mM NaOH B) 10 mM NaOH containing 1.0 M NaClO4 40-70%B (0-15 min), 100%B (15-20 min) |
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 25°C |
| Detection | UV at 260 nm |
| Injection | 6 µL (each 3.3 nmol/mL) |
一本鎖RNA（アンチセンス鎖）と二本鎖RNA（siRNA）を、カラム長の異なるAccura BioPro IEX QFで分析した例を示しています。核酸の分離においては、イオン交換モードでもカラム長が長いほうが分離が良好になる場合があり、この例においても150 mm長のカラムで最も分離度が大きくなっています。Accura BioPro IEXは、150 mm長や250 mm長のカラムもラインナップしており、高分離分析に有用です。
1. antisense strand
2. siRNA duplex
| Column | Accura BioPro IEX QF (5 µm) |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 1.0 M NaClO4 |
| Flow rate | 0.5 mL/min |
| Temperature | 60°C |
| Detection | UV at 260 nm |
| Injection | 8 µL (each 5 nmol/mL) |
カラムハードウェア素材の異なる同一担体のカラムで、オリゴ核酸を分析しました。
PEEK製カラムでは吸着が認められますが、Accuraでは初回注入時から安定したピーク面積で良好なピーク形状が得られています。
Accura BioPro IEXは、吸着しやすい核酸についても、プレコンディショニングを行わずに分析可能です。
| Column | 5 µm, 100 X 4.6 mmI.D |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 1.0 M NaClO4 25-40%B (0-15 min), 40%B (15-20min) |
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 60°C |
| Detection | UV at 260 nm |
| Injection | 4 µL (5 nmol/mL) |
| Sample | 21mer RNA |
BioPro IEX SFのロット間再現性を示しています。どの充填剤ロットでも高い分離能を有し、優れた再現性が得られています。高いロット間再現性によりバイオ医薬品の品質管理にも最適です。
| Column | BioPro IEX SF (5 µm), 100 X 4.6 mmI.D. |
|---|---|
| Eluent | A) 20 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 6.5) B) 20 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 6.5) containing 0.2 M NaCl 0-50%B (0.5-30 min) |
| Flow rate | 0.5 mL/min (180 cm/hr) |
| Temperature | 25°C |
| Detection | UV at 215 nm |
| Injection | 10 µL |
| Sample | Humanized monoclonal IgG1 |
BioPro IEX QAは、非特異的吸着が極めて小さい親水性ポリマーを基材としたイオン交換カラムで、タンパク質と相互作用しやすい表面構造を有しています。このため、タンパク質に対して高い動的吸着容量および回収率を示します。
BSAの動的吸着容量および回収率
| Dynamic binding capacity (mg/mL-resin, 10% breakthrough) |
Eluted amount (mg/mL-resin) |
Recovery* (%) |
|
|---|---|---|---|
| BioPro IEX QA | 126 | 120 | 95 |
| A社 (porous Q type) | 73 | 58 | 79 |
| B社 (porous Q type) | 100 | 35 | 35 |
Breakthrough curves（破過曲線）
| Column | BioPro IEX QA, 50 X 4.6 mmI.D. A社 (porous Q type) 50 X 4.6 mmI.D. B社 (porous Q type) 50 X 5.0 mmI.D. |
|---|---|
| Linear velocity | 180 cm/hr |
| Equilibration buffer | 20 mM Tris-HCl (pH 8.6) |
| Elution buffer | 20 mM Tris-HCl (pH 8.6) containing 1.0 M NaCl |
| Detection | UV at 280 nm |
| Sample | 1 mg/mL Bovine serum albumin (BSA) in equilibration buffer |
